پیشینه تحقیق میکروبیولوژی هانسونلا پلی مورفا و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیتی دارای ۳۰ صفحه می باشد فایل پیشینه تحقیق به صورت ورد  word و قابل ویرایش می باشد. بلافاصله بعد از پرداخت و خرید لینک دنلود فایل نمایش داده می شود و قادر خواهید بود  آن را دانلود و دریافت نمایید . ضمناً لینک دانلود فایل همان لحظه به آدرس ایمیل ثبت شده شما ارسال می گردد.

فهرست مطالب

مقدمه    ۵
۱-۱میکروبیولوژی هانسونلا    ۵
۱-۲مطالعات ژنتیکی    ۶
۱-۳ نقشه ژنتیکی    ۹
۱-۴ تولیدمثل و اسپورزایی    ۱۰
۱-۴-۱ اسپورزایی    ۱۰
۱-۵ پروموترهای مورد استفاده در سیستم های بیانی هانسونلا پلی مورفا   RB11    ۱۱
HARS1- 1-5-1     ۱۲
۱-۶ بیان همزمان:    ۱۳
۱-۷ ترشح پروتئین های هترولوگ الیگومری و فعال    ۱۴
۱-۸ تولید واکسن نوترکیب    ۱۴
۱-۹ مخمرها به عنوان میکروارگانیسم های تولیدی    ۱۵
۱-۱۰ ساخت سویه هانسونلا پلی مورفا بیان کننده آنتی ژن   HBs    ۱۵
۱-۱۰-۱ تولید کاست بیانی و وکتور پلاسمیدی    ۱۵
۱-۱۱ انتقال (ترانسفرم) وکتورهای بیانی به هانسونلا پلی مورفا    ۱۶
۱-۱۱-۱ روش پلی اتیلن گلیکول    ۱۶
۱-۱۲ جداسازی سویه های نوترکیب    ۱۶
۱-۱۳ تنظیم متابولیسم متانول    ۱۶
۱-۱۴ فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیتی  (G-CSF)    ۱۷
۱-۱۵ ژن  gcsf      ۱۷
۱-۱۶ پروتئین  GCSF    ۱۷
۱-۱۷ عملکرد پروتئین   GCSF      ۱۸
منابع و مواخذ    ۲۱

منابع

مهدی شریفی تبار،علی اکبر حبشی،حمید رجبی معماری”بیان فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیت انسانی در کاهوی ترانس پلاستوم“مجله بیومدیکال ایران،خرداد ۱۳۹۲؛۱۷(۳):۱۵۸-۱۶۴٫

ناقوسی حامد،بهزادیان فریدا،سعیدی نیا علیرضا” جهش زایی هدفدار در فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیت انسانی و کلون وبیان آن در باکتری “ Escherichia coliمجله بیوتکنولوژی ایران ,مهر ۱۳۸۷؛۶(۴):۲۲۹-۲۳۴٫

Teunisson DJ, Hall HH, Wickerham LJ (1960) Hansenula angusta, an excellent species for demonstration of the coexistense of haploid and diploid cells in a homomallic yeast. Mycologia 52: 184-188.

Reinders A, Romano I, Wiemken A, de Virgilio C (1999) The thermophilic yeast Hansenula polymorpha does not require trehalose for normal acquisition of thermotolerance. J Bacteriol 181:4665-4668.

Wickerham LJ (1970) Hansenula H et P Sydow, in: The Yeasts, a Taxonomic Study 2nd Edn (Lodder J, Ed). North Holland,Amsterdam, The Netherlands, pp. 226-315.

Mannazzu I, Guerra E, Ferretty R, Pediconi D,Fatichenti F (2000) Vanadate and copper induce overlapping oxidative stress responses in the vanadate-tolerant yeast Hansenula polymorpha. Biochem Biophys Acta 1475: 151-156.

Roggenkamp R, Hansen H, Eckart N, Janowitcz Z, Hollenberg CP (1986)Transformation of methylotrophic yeast Hansenula polymorpha by autonomous replication and integration vectors. Mol Gen Genet 10: 302-308.

van Dijken, JP, Otto, R, Harder, W (1976)Growth of Hansenula polymorpha in a methanol-limited chemostat. Physiological responses due to the involvement of methanol oxidase as a key enzyme in methanol metabolism. Arch Microbiol in:137-144.

Krappmann S, Pries R, Gellissen G, Hiller M,Braus GH (2000) HARO7 encodes chorismate mutase of the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha and is derepressed upon methanol utilization. J Bacteriol 182: 4188-4197.

Mannazzu I, Guerra E, Strabioli R, Maestrale GB, Masia A, Zoroddu MA, Fatichenri(1997) Vanadium affects vacuolation and phosphate metabolism in Hansenula polymorpha. FEMS Microbiol Lett 147: 23-28.

Mannazzu I, Guerra E, Strabioli R, Pediconi D, Fatichenti F (1998) The vanadate tolerant yeast undergoes cellular reorganization during growth in, and recovery from, the presence of vanadate. Microbiology 144: 2589-2597.

Ledeboer A M, Edens L, Maat J, Visser C,Boss JW, Verrips CT (1985) Molecular cloning and characterization of a gene coding for methanol oxidase in Hansenula polymorpha. Nucleic Acids Res 13: 3063-3082.

 مقدمه

در طول چند دهه اخیر به سه دلیل زیر مطالعات زیادی بر روی مخمر هانسونلا پلی مورفا صورت گرفته است:

رشد سریع این مخمر با مصرف متانول به عنوان تنها منبع کربن و انرژی،

تحمل دماهای بالا (توانایی رشد در دمای °C49)،

تبادل آسان محتوای ژنتیکی بین سلولهای هاپلوئید و دیپلوئید ( (Teunisson, 1960.

۱-۱میکروبیولوژی هانسونلا

این مخمر برای اولین بار در سال ۱۹۵۱ از آب پرتقال حاوی ۵۰% قند در فلوریدای آمریکا جداسازی شد.

سلولهای هانسونلا به هر دو صورت سلولهای دیپلوئیدی و هاپلوئیدی رشد می کنند. کلنی ها بر روی محیط کشت جامد دارای طیف رنگی صورتی هستند که به علت آسکوسپورها می باشد. کلنی سلولهای هاپلوئیدی و دیپلوئیدی از نظر رنگ، اندازه، چیدمان سلولی و سایر ویژگیها با یکدیگر متفاوت می باشند.

تاکنون اطلاعاتی در مورد توانایی هانسونلا پلی مورفا در تشکیل میسلیوم کاذب پیدا نشده است (Teunisson, 1960; Wickerham, 1970)

هانسونلا پلی مورفا میتواند در دمای بالا و در °C42 رشد کند. به نظر می رسد در این مخمر سنتز تره هالوز قسمتی از پاسخ به قحطی منبع کربن و شوک حرارتی است و پیشنهاد شده که این ترکیب، فاکتور مهمی در مقاومت دمایی است (Reinders, 1999).

مطالعات انجام شده بر روی هانسونلا پلی مورفا به طور عمده به بررسی پروتئین های سلولی، ساختار سلولهای مخمر در حال رشد و یا بررسی متابولیسم مخمر پرداخته اند.

در سویه هایی از این مخمر که از متانول به عنوان منبع انرژی استفاده می کنند، آنزیمهای متانول اکسیداز و کاتالاز، به فرم کریستالی درون اندامکی به نام پراکسی زوم قرار گرفته اند (Van Dijken, 1975).

هانسونلا پلی مورفا بعنوان یک ارگانیسم متیلوتروف، یک مدل مطلوب برای تحقیق در مورد عملکرد پراکسی زم ها و تکامل حیات می باشد. همچنین به منظور بررسی ژنتیکی جنبه های مختلف متابولیسم سلولی از جمله متابولیسم متانول، جذب نیترات و مقاومت به فلزات سنگین مورد مطالعه قرار می گیرد ( (Mannazzu, 2000.

با وجود این ویژگیها، هنوز قابلیت های ژنتیکی و طبیعی سویه های مورد استفاده از این مخمر کاملاً مشخص نیست و کنترل ژنتیکی فرایندهای سلولی پایه از جمله کنترل تقسیم سلولی، تولید مثل و اسپورزایی هنوز با سؤالات زیادی مواجه می باشد.

با اینحال هانسونلا پلی مورفا به عنوان یک میزبان برای تولید پروتئین های خارجی(ترشحی به خارج از سلول) توجه زیادی را به خود جلب کرده است ( (Gellissen, 2000.

 ۱-۲مطالعات ژنتیکی

تحقیقات ژنتیکی تاکنون تنها بر روی سه سویه از این مخمر انجام شده است که شامل سویه های DL-1، CBS 4732 و NCYC 495 می باشند.

پیدایش سویه های هانسونلا پلی مورفا از سویه های جهش یافته اکسوتروف شروع شده است.این موتانت ها از سویه هایی که در بالا نام برده شد با استفاده از ترکیب شیمیایی N-متیل-N-نیترونیتروزو گوانیدین[۱] یا اتیل متان سولفونات به دنبال یک مرحله غنی سازی با نیستاتین به دست آمده اند.

از طرف دیگر اشعه ماوراء بنفش نیز یک موتاژن بسیار قوی است که طیف موتانت های ایجاد شده بوسیله آن در مقایسه با موتانت های حاصل از مواد شیمیایی متفاوت و گسترده تر می باشد (Roggenkamp, 1986).

بطور کلی فرایندهای جهش زایی متعددی در این مخمر انجام شده است که یکی از این فرایندها، جهش های ژنتیکی است که منجر به سنتز اسیدآمینه های آروماتیک می شود که به مخمر اجازه رشد در محیط غنی YPD را نمی دهند (Krappmann, 2000).

از جمله انواع جهش یافته های اکسوتروف میتوان به موارد  زیر اشاره نمود:

سویه هانسونلا پلی مورفای جهش یافته ای که برای رشد بر روی محیط های معدنی الزاماً به ریبوفلاوین نیاز دارد و محدود نمودن منبع ریبوفلاوین تأثیر شدیدی بر روی سنتز مجموعه الکل اکسیداز و تکثیر پروکسی زومهای سلولی دارد (Evers, 1994).

نوع دوم جهشهای ایجاد شده در ژن FAD1 است که اسید چرب دلتا[۲] را کد می کند. کاربرد این سلولهای جهش یافته در بررسی ژنتیکی سنتز اسیدهای چرب غیراشباع می باشد ( (Anamnart, 1998.

تحقیقات اخیر نشان داده است که هانسونلا پلی مورفا میتواند برای بررسی مقاومت به فلزات سنگین مورد استفاده قرار گیرد چراکه توانایی رشد در حضور تجمع فلزات سنگین متفاوت را که برای سایر موجودات سمی است دارا می باشد (Mannazzu, 1997).

در طی رشد در محیط حاوی vanadate، سلول ها افزایش قابل توجهی از پلی فسفات های واکوئلی پیدا میکنند. احتمالاً نقش این واکوئل ها در فعال کردن مکانیسم های اتوفاژی است که شاید برای جبران کمبود مواد مغذی و یا حذف ساختارهای سلولی ناهنجار القاء شده توسط این یون فلزی لازم باشند  (Mannazzu, 1998).

سلول های هانسونلا پلی مورفا در مقایسه با S. cerevisiae به یون های کادمیوم(cd²⁺) بسیار مقاومند )این مقاومت به شدت به ماهیت منبع کربن استفاده شده بستگی دارد. سلول ها اغلب زمانیکه بر روی محیط حاوی گلوکز رشد میکنند به کادمیم مقاومتراند اما در طی رشد بر روی محیط حاوی متانول، به عنوان منبع کربن و انرژی، به این یون بسیار حساس می باشند. سویه های جهش یافته مقاوم به کادمیوم به سه گروه cds1، cds2 و cds3 تقسیم میشوند ( (Lahtchev, unpublished data.

جهش در ژنهای کدکننده آنزیم های پراکسی زومی یا سیتوپلاسمی درگیر در متابولیسم متانول

ژن AOX1 (MOX)، کدکننده آنزیم الکل اکسیداز (AO) موجود در ماتریکس پروکسی زوم است و یکی از بهترین ژن های هانسونلا پلی مورفا در تحقیقات می باشد (Ledeboer, 1985). الکل اکسیداز یک آنزیم فلاووهومواکتامری است که اولین مرحله در متابولیسم متانول را کاتالیز میکند. مونومر این آنزیم در سیتوپلاسم سنتز شده و به صورت هومواکتامر فعال، تجمع یافته و در داخل پراکسی زوم قرار میگیرد. حدود ۲۱۰ نوع جهش یافته از ژن AO وجود دارد ( (Titorenko, 1995. بیان این ژن در مرحله رونویسی تنظیم میشود.

در هانسونلا پلی مورفا وقایع مربوط به مهار و القاء ژنهای کد کننده آنزیم های اختصاصی متانول و یا آنزیمهای پراکسی زومی به شدت کنترل می شوند. تنظیم در سطح رونویسی با مکانیسم های کنترلی قابل ملاحظه ای انجام میشود. عناصر تنظیمی به فرم سیس[۱] در بالادست ژنهای DAS، CAT[2] و FMD[3] با نقش مهاری برای گلوکز شناسایی شده اند.

۱-۳ نقشه ژنتیکی

آنالیز تتراد در هانسونلا پلی مورفا امکان پذیر است اما اندازه کوچک اسپورها روند این آنالیز را کند می نماید. در کشت سلول های دیپلوئیدی تفکیک مندلی نرمال در مورد بیشتر مارکرهای ژنتیکی مشاهده شده است.

الکتروفورز DNA کروموزومی هانسونلا پلی مورفا به روش pulse field، ۳ تا ۷ باند را نشان داده است که به نوع سویه وابسته است (Mari, 1993)اما بطور کلی مشخص شده است که هانسونلا پلی مورفا حداقل ۷ کروموزوم دارد که بعضی از آنها مضاعف (دو تایی) هستند (Naumov, 1992).

۱-۴ تولیدمثل و اسپورزایی

فاکتورهایی در تولیدمثل و اسپورزایی هانسونلا پلی مورفا درگیرند که هنوز بطور کامل شناسایی نشده اند. از القاء کننده های قوی تولیدمثل جنسی میتوان به مالتوز، گلیسرول و سوربیتول اشاره کرد  (Lahtchev, unpublished data).

سلول های هاپلوئید بر اساس نوع فنوتیپشان به چهار گروه تقسیم میشوند:

سویه های گروه ۱ و ۲ میتوانند هیبریداسیون متقاطع[۴] داشته باشند. این سویه ها سریع الرشد و تهاجمی بوده و پس از گذشت یک روز در محیط انتخابی، دیپلوئیدی می شوند. سویه های گروه ۳ توانایی جفتگیری با اعضای گروه ۱ و ۲ را دارند و سویه های مثبت (+) نامگذاری می شوند. سویه های گروه ۴ تنها میتوانند با گروه مثبت جفتگیری کنند و گروه منفی (-) را تشکیل دهند.

۱-۴-۱ اسپورزایی

در هانسونلا پلی مورفا سلولهای هاپلوئیدی توانایی اسپورزایی دارند. اسپورزایی هاپلوئیدها بعد از گذشت ۸ روز در محیط حاوی ۳% مالتوز در دماهای پائین قابل تشخیص است. اسپورزایی با ظاهر شدن کلنی های دیپلوئیدی به رنگ صورتی روشن همراه می باشد.

[۱]  Cis acting regulatory elements

[۲]  Catalase

[۳]  Formate dehydrogenase

[۴]  Cross hybridization

[۱] N-Methyl-N- nitronitroso-guanidine

[۲]  Fatty acid desaturase

تمامی فایل های پیشینه تحقیق و پرسشنامه و مقالات مربوطه به صورت فایل دنلودی می باشند و شما به محض پرداخت آنلاین مبلغ همان لحظه قادر به دریافت فایل خواهید بود. این عملیات کاملاً خودکار بوده و توسط سیستم انجام می پذیرد. جهت پرداخت مبلغ شما به درگاه پرداخت یکی از بانک ها منتقل خواهید شد، برای پرداخت آنلاین از درگاه بانک این بانک ها، حتماً نیاز نیست که شما شماره کارت همان بانک را داشته باشید و بلکه شما میتوانید از طریق همه کارت های عضو شبکه بانکی، مبلغ  را پرداخت نمایید.