2,761 views
پیشینه تحقیق آنزیم ال-آسپاراژیناز و ویژگیهای ساختاری آن و مسائل و رویکردهای مرتبط با استفاده درمانی از ال-آسپاراژیناز دارای ۵۰ صفحه می باشد فایل پیشینه تحقیق به صورت ورد word و قابل ویرایش می باشد. بلافاصله بعد از پرداخت و خرید لینک دنلود فایل نمایش داده می شود و قادر خواهید بود آن را دانلود و دریافت نمایید . ضمناً لینک دانلود فایل همان لحظه به آدرس ایمیل ثبت شده شما ارسال می گردد.
مقدمه ۵
۱- ۱ آنزیم ال-آسپاراژیناز ۷
۱-۲ میکرو ارگانیسمهای تولید کننده ۹
۱-۳ مکانیسم تنظیمکننده ترشح آنزیم آسپاراژیناز ۱۳
۱-۴ کلاسهای عمومی از ال-آسپاراژیناز: ۱۴
۱-۵ روش تعیین سختی و ساختار ال-آسپاراژیناز ۱۵
۱-۶ ویژگیهای ساختاری ال-آسپاراژیناز ۱۵
۱-۶-۱ساختار مونومری آنریم ال-آسپاراژیناز ۱۵
۱-۶-۱-۱ شرح جایگاه فعال ال-آسپاراژیناز ۱۷
۱-۶-۲ ساختار تترامرآنزیم ال-آسپاراژیناز ۱۸
۱-۶-۳ ساختار اُکتامرآنزیم ال-آسپاراژیناز ۱۹
۱-۷ انواع آنزیم ال-آسپاراژیناز برحسب منشأ جداسازی: ۲۰
۱-۷-۱-آنزیمهای بومی: ۲۰
۱-۷-۱-۱ ال-آسپاراژینازی از اشرشیا کلی ۲۰
۱-۷-۱-۲ ال-آسپاراژینازی از اروینیا : ۲۱
۱-۷-۲ آنزیم اصلاحشدهPEG) -آسپاراژیناز) ۲۲
۱-۸ کاربرد ال – آسپاراژینازها ۲۴
۱-۸- ۱ مکانیسم عمل بهعنوان یک کمککننده به فرآوری مواد غذایی ۲۵
۱-۸-۲ مکانیسم عمل بهعنوان یک دارو ۲۷
۱-۹ علم شیمی و فارماکولوژی برای دارو ۲۸
۱-۱۰ نیمهعمر دارو ۲۸
۱-۱۱ مسائل و رویکردهای مرتبط با استفاده درمانی از ال-آسپاراژیناز ۲۹
۱-۱۱-۱ عوارض ایمونولوژیک ۲۹
۱-۱۱-۲ مقاومت در برابر آسپاراژیناز ۲۹
۱-۱۱-۳ سمیت دارو ۳۰
۱-۱۲ فارموکینیتیک ۳۱
۲-۱ مروری بر تحقیقات انجام شده در ایران و خارج از ایران ۳۴
۲-۱-۱ تحقیقات انجام شده بر روی باکتری های خاکزی مولد آنزیم ال-آسپاراژیناز ۳۴
۲-۱-۲ تحقیقات انجام شده بر روی آنزیم ال-آسپاراژیناز به منظور بهینه سازی ۳۶
۲-۱-۳ تحقیقات انجام شده بر روی آنزیم ال-آسپاراژیناز با استفاده از محیط کشت اختصاصی M9 ۳۹
۲-۱-۴ تحقیقات انجام شده بر روی آنزیم ال-آسپاراژیناز با استفاده از روش نسلریزاسیون ۳۹
۲-۱-۵ تحقیقات انجام شده بر روی باکتری های مولد آنزیم ال-آسپاراژیناز جدا شده ار آب و رسوبات ۴۰
۲-۱-۶ تحقیقات انجام شده بر روی آنزیم ال-آسپاراژیناز بر اساس روش SDS-PAGE ۴۱
منابع: ۴۳
قانع. م, بمبئی ب و قانع م. ۱۳۸۷ «غربالگری سویههای باکتری اشرشیاکلی جهت تولید آنزیم آسپاراژیناز II». فصلنامه علمی- پژوهشی «دانش زیستی ایران».
ناظمی ع ، غلامیان س ، میری نرگسی م.س (۱۳۹۲) جداسازی و شناسایی مولکولی باسیلوس های تولیدکننده آنزیم ضد سرطان ال‑آسپاراژیناز خارج سلولی از خاک. مجله تازههای بیوتکنولوژی سلولی- مولکولی دوره سوم، شماره یازدهم
یزدانی ر ، مبینی دهکردی م ، رستگاری ع.ا (۱۳۹۱) جداسازی و شناسایی باکتریهای بومی ایران مولد آنزیم ال-آسپاراژیناز.مجله دنیای میکروبها،سال پنجم شماره اول و دوم صفحات ۴۶-۳۹
افراسیابی ر.آقایی پور خ.کفیل زاده ف.صفویه ص(۱۳۸۹) کلون سازی،تعیین توالی و بیان ژن آسپاراژیناز باکتری اروینیا کریزانتمی.مجله دنیای میکروبها.سال سوم.شماره اول.بهار ۸۹ صفحات۱۵-۷
ایزدپناه قشمی ف، جوادپور ص. ملکزاده ک(۱۳۹۲) جداسازی و شناسایی مولکولی باکتریهای تولیدکننده ال-آسپاراژیناز از خلیجفارس. مجله دنیای میکروبها سال ششم شماره سوم (پیاپی۱۶) پاییز ۱۳۹۲- صفحات ۲۴۵-۲۳۷
واحدی ح، عزیزی م.ح، کبارفرد ف، برزگر م ، حمیدی اصفهانی. ز(۱۳۹۰) تأثیر درجهی استخراج آرد و میزان آنزیم آسپاراژیناز بر کاهش آسپاراژین آزاد در خمیر نان. افق دانش؛ فصلنامهی دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی گناباد ( دورهی ۱۸:شماره۱ :بهار۹۱)
Rao, Subba. 1999. Soil Microbiology. Fourth ed. ed. Enfield: Science Publishers-84
Rossi, S. 2011. Australian Medicines Handbook 2011. Adelaide: Australian Medicines Handbook Pty Ltd
Kamble K D , Bidwe P R , Muley V Y , Kamble L H , Bhadange D G and Musaddiq ۲۰۱۲٫ characterization of l-asparaginase producing bacteria from water, farm and saline soil.3(1):116-119
Ashrafi H,. Amini M, Mohammadi-Samani S, Ghasemi Y, Tabandeh M, Daneshamouz S. 2012. Protein bioconjugates: the novel delivery system for L-asparaginase. Research in Pharmaceutical Sciences, 2012;7(5)
Gulati, R., R.K. Saxena, and R. Gupta. 1997. “A rapid plate assay for screening L-asparaginage producing micro-organisms.” Letters in applied microbiology 24:23-26
Selwood, T. and E. K. Jaffe. 2011. “Dynamic dissociating homo-oligomers and the control of protein function.” Arch. Biochem. Biophys. 519(2):131–۴۳
Jaffe, E.K. 2005. “Morpheeins – a new structural paradigm for allosteric regulation.” Trends Biochem. Sci. 30(9):490–۴۹۷
Borek D and Jaskólski M .2001. Sequence analysis of enzymes with asparaginase activity. Vol. 48 No. 4/2001
Appel, IM, C van Kessel-Bakvis, R Stigter, and R Pieters. 2007. “Influence of two different regimens of concomitant treatment with asparaginase and dexamethason] on hemostasis in childhood acute lymphoblastic leukemia.” Leukemia 21(11):2377–۸۰٫
Sahira Nsayef Muslim.2014. Production, Purification and Characterization of a novel L-asparaginase from Acinetobacter baumannii with anticancerous activity.
آنزیمها بهعنوان تسریعکنندههای واکنشهای شیمیایی نقش مهمی در شکلگیری حیات سلولی بهنحویکه امروزه میشناسیم ایفا میکنند. بهکارگیری هدفمند آنزیمها بهمنظور مداخله در سیر واکنشهای شیمیایی و بیوشیمیایی همواره یکی از موضوعات موردتوجه در صنعت و پزشکی بوده است( رائو، ۱۹۹۹)
باکتریها از اصلیترین منابع تولید آنزیم به شمار میرود.. در این تحقیق باکتریهای جداشده از خاکهای مناطق مختلف استان گلستان (مزرعه، جنگل، باغ) ازنظر تولید آنزیم ال-آسپاراژیناز خارج سلولی موردبررسی قرار گرفتند.
خاک یکی از مکانهای عمده میکروارگانیسمها محسوب میشود. فراوانترین میکروارگانیسمها در خاک، باکتریها هستند. خاک باغچه در هر گرم محتوی میلیونها باکتری است. درجاهای عمیق تعداد آنها کاهش مییابد. قارچها به تعداد کمتر از باکتریها در خاک یافت میشوند.( رائو، ۱۹۹۹)
مهم ترین گروه های باکتر ی های خاک عبارتند از :آرتروباکتر، استرپتومایسس ها ، سودوموناس، نیتروباکتریاسه،متانوموداسه،اسپیریلاسه،تیوباکتریاسه،اُ باکتریال ها ( که خود شامل گروه های ازتوباکتریاسه، ریزوبیاسه،آکروموباکتریاسه،میکروکوکاسه،کورینه باکتریاسه،باسیلاسه می باشد)، میکسوباکتریال ها، سیانوباکترها. (رائو،[۱]۱۹۹۹ ).
ال-آسپاراژیناز (L-asparagine amidohydrolase, EC 3.5.1.1) آنزیمی است که اسیدآمینه ال-آسپاراژین را به دو جزء آسپارتیک اسید[۲] و آمونیاک[۳] میشکند(رائو، ۱۹۹۹ )
در حالت عادی، سلولهای توموری قادر به تولید ال-آسپاراژین موردنیاز برای ادامه حیات سلول نیستند. بنابراین چنانچه این سلولها با آنزیم ال-آسپاراژیناز تیمار گردند، به این دلیل که قادر به جایگزینی اسیدآمینه ال-آسپاراژین تخریبشده نمیباشند، بهطور انتخابی از بین خواهند رفت بدون اینکه به سلولهای سالم آسیب وارد گردد. ( سینگ و اسریواستاوا ،۲۰۱۲)آنزیم آسپاراژیناز در صنعت فرآوری مواد غذایی نیز برای تأمین معیارهای مرتبط با سلامت مورداستفاده قرار میگیرد. ( سینگ و اسریواستاوا ،۲۰۱۲)
پرسش اصلی تحقیق
۱٫ آیا باکتریهای استخراجشده آنزیم ال-آسپاراژیناز را دارا هستند؟
۲٫آیا پتانسیل مناسبی جهت تولید آنزیم ال-آسپاراژیناز در باکتریهای خاکزی وجود دارد یا خیر؟
اهداف تحقیق
۱-جداسازی و شناسایی باکتریهای مولد آنزیم ال-آسپاراژیناز از خاک منطقه
۲-مقایسه ایزولهها ازنظر میزان تولید آنزیم ال_آسپاراژیناز و معرفی سویههای برتر
۳-شناسایی مولکولی و تعیین سکانس ایزولههای مؤثر در تولید آنزیم
هدف کاربردی : ایجاد دانش فنی تولید آنزیم ال-آسپاراژیناز
فرضیات تحقیق
۱-برخی از باکتریهای خاکزی پتانسیل تولید آنزیم ال-آسپاراژیناز را درند.
۲-احتمالاً میزان تولید آنزیم بسته به نوع خاک و محل نمونهگیری متفاوت است.
اولین بار فعالیت آمیدوهیدرولتیک ال-آسپاراژیناز توسط لانگ[۱] در سال ۱۹۰۴ مشاهده شد و بیشتر توسط فورز و فریدمن[۲] در سال ۱۹۱۰ تأیید شد و توسط سلمانتی[۳] در سال ۱۹۲۲ فعالیت بالایی از آنزیم در سرم خوکچههندی مشخص شد. فعالیت بالای ال-آسپاراژیناز فقط در سرم خوکچههندی مشاهده شد درحالیکه دیگر پستانداران فاقد این آنزیم بودند. پتانسیل آنزیم اولین بار توسط کید[۴]در سال ۱۹۵۳ موردبررسی قرار گرفت که فعالیت ضدلنفوم در سرم موش مشاهده شد.پسازآن نیومن[۵] و مک کوی[۶] در سال ۱۹۵۶ متابولیت های مختلف بدن در بین سلولهای سالم و بدخیم در شرایط آزمایشگاهی در حضور و عدم حضور اسیدآمینه آسپارژین نشان دادند،که رشد سلولی بهدستآمده از والکرسارکینوسارکوما[۷] نیازمند ال-آسپاراژین است هالی و همکاران[۸] در سال ۱۹۶۱ با استفاده از سلولهای سرطانی خون نتایج مشابهی را به دست آورد .بروم[۹] در سال ۱۹۶۱ مطالعهای مرتبط با فعالیت ضد لنفوم سرم خوکچههندی در خصوص کاهش آسپارژین توسط ال-آسپاراژیناز انجام داد. اگرچه تئوری استفاده از آنزیم برای سرطان پذیرفتهشده اما تعدادی مشکل در استفاده بالینی آنزیم وجود دارد که تا آن زمان خوکچههندی تنها منبع بود. تنها در سال ۱۹۶۴ریستون[۱۰] و ماشبرن[۱۱] منابع دیگری از آنزیم و آنزیم ال-آسپاراژیناز اشیرشیا کلی[۱۲] را موردمطالعه قراردادند. دو نوع آسپاراژیناز از اشرشیا کلی تولیدشده که شامل EC-1 (سیتوپلاسمیک) و EC-2(پری پلاسمیک) است که فقط EC-2 فعالیت ضدلنفوم را از خود نشان داده است. ( سینگ و اسریواستاوا ،۲۰۱۲)
ال-آسپاراژیناز در اشرشیا کلی به مقدار زیادی تولید میشود که منجر به آغاز طرح مطالعات بالینی ال-آسپاراژیناز شده است. اثر بالینی آنزیم توسط چندین آزمایش در بیماران تأیید شد. ریستون و یلین[۱۳] در سال ۱۹۶۶ موفق به خالصسازی بخشی از دو ایزو فرم ال-آسپاراژیناز از سرم خوکچههندی شدند. جالبتوجه است که تنها یک ایزو فرم از فعالیت ضد لنفوم در داخل بدن به نمایش گذاشتهشده است, ازآنجاییکه استخراج این آنزیم از سرم خوکچههندی به مقدار کافی دشوار است، منابع دیگری مثل میکروبها موردتوجه قرار گرفتند. اوتگن[۱۴] و همکارانش در سال ۱۹۶۷ برای اولین بار بود که اثرات ال-آسپاراژیناز در انسان مبتلا به لوسمی نشان دادند و در مشاهده مهم دیگر توسط اولد[۱۵]و همکارانش فعالیت ضد تومور در سگ با لنفوسارکومای[۱۶] خود به خودی را نشان دادند واکنش افزایش حساسیت برای ال-آسپاراژیناز اشرشیا کلی شناختهشده و نسبتاً رایج است. مطالعه بر روی ال-آسپاراژیناز اشرشیا کلی و اروینیا کارتورا[۱۷] با عدم واکنش متقاطع مشخص شد، هر دو آنزیم مقدار بالایی از ایمنیزایی را نشان دادندکه تلاش میشود دارویی بهمنظور کاهش ایمنیزایی با حفظ فعالیت آنزیم ساخته شود. پلی اتیلن گلیکول[۱۸] (PEG) بهعنوان یک فرآیندی که در آن واکنشهای ایمنی لغو شده بدون اینکه خاصیت ضد سرطانی[۱۹] آن تغییر یابد به رسمیت شناختهشده است. این نسخه اصلاحشده آنزیم در مدل حیوانی کاهش تشکیل آنتیبادی را نشان داد و بهطور قابلتوجهی اثر آن طولانیمدت تر بود . در سالهای اخیر استفاده از ال-آسپاراژیناز در درمان لوسمی های دیگر مانند اختلالات لنفوپرولیفراتیو[۲۰] گسترشیافته است.و درنهایت بهعنوان دارو برای درمان سرطان خون توسط فاد[۲۱] در سال ۱۹۷۸ مورد تأیید قرار گرفت. آسپاراژیناز آنزیمی است که هیدرولیز آسپاراژین به آسپارتیک اسید را کاتالیز میکند. آسپاراژینازها بهطور طبیعی توسط میکروارگانیسمها تولید میگردند (روسی[۲۲] ،۲۰۱۱). دلیل استفاده از آن این است که زیستتخریبپذیر[۲۳] و غیر سمی بوده درحالیکه بسیار پرهزینه است.(.کمبل[۲۴] ،۲۰۱۲)
ال-آسپاراژیناز[۲۵] فرمی از آسپاراژیناز است که بر روی اسیدآمینه ال-آسپاراژین اثر میکند. ال-آسپاراژین مانند سایر اسیدآمینههای دارای فرم ال (L)، بهطور طبیعی طی ترجمه در سطح ریبوزوم در ساختار پروتئینها قرار میگیرد (برخلاف اسیدآمینههای فرم دی (D) که طی تغییرات پس از ترجمه[۲۶] ، در ساختار پروتئین جای میگیرند) (پیسارویکز و همکاران،[۲۷]۲۰۰۵).
تولید ال-آسپاراژیناز از منابع میکروبی از طریق تخمیر روش امیدوارکنندهی است با توجه به اینکه مقرونبهصرفه و سازگار با محیطزیست است. .( اشرف ، ۲۰۰۳ ) ال-آسپاراژیناز در سراسر جهان به روش تخمیر در حالت مایع(SMF) تولید میشود اگرچه تخمیر به روش مایع هزینهبر است اما هنوز یک روش معمول است که در سراسر جهان برای تولید ال-آسپاراژیناز استفاده میشود بااینحال کاستیهای اصلی تولید آنزیم به روش تخمیر مایع : غلظت کم تولید و درنتیجه کاهش حملونقل و دفع حجم مقدار زیادی از آب در طول فرآیند است. بنابراین این روش پرهزینه، بسیار مشکل و عملکرد ضعیفی دارد در این زمینه تخمیر حالتجامد (SSF) برای غلبه بر اشکالاتی که تخمیر مایع دارد موردتوجه فراوان قرارگرفته است. تخمیر در حالت جامد در مقایسه با روش(SMF) مؤثرتر بوده و دارای عملکردی چند برابر بالاتر است.( اشرف ، ۲۰۰۳[۲۸])(SSF) دارای مزایای متعددی نسبت به تخمیر مایع است ازجمله نیاز به انرژی کمتر ،خطر بسیار کم آلودگی باکتریایی ، نیاز پایینتر به آب و نگرانیهای زیستمحیطی کمتر در مورد دفع زبالههای جامد ،علاوه بر این استفاده از زبالههای جامد کشاورزی بهعنوان یک سوبسترا برای کربن و انرژی موردنیاز برای (SSF) باعث میشود که این رویکرد سازگار با محیطزیست شود. معمولاً بسترهایی که برای (SSF) استفاده میشود آب پلیمری غیرقابلحل از نشاسته و مواد سلولزی است.( سینگ و اسریواستاوا ،۲۰۱۲)
میکروارگانیسمهای مختلفی شناسایی گردیدهاند که قادر به تولید آنزیم آسپاراژیناز میباشند.در جدول ۱-۱ نام تعدادی از این میکروارگانیسمها آورده شده است. (گولاتی و همکاران ۱۹۹۷)
میکروبهای دریایی نشان دادند که یک منبع بالقوه برای تولید ترکیبات فعال زیستی هستند. در میان میکروارگانیسمهای دریایی ، اکتینوباکتر به عنوان قویترین منبع آنتیبیوتیک و سایر متابولیت های فعال زیستی موردتوجه خاصی قرارگرفته است. ( سینگ و اسریواستاوا ،۲۰۱۲). اکتینوباکترهای دریایی یک منبع قوی از متابولیت های ثانویه بوده که اغلب این ترکیبات از استرپتومایسس مشتق شدهاند.. ( سینگ و اسریواستاوا ،۲۰۱۲)تولید آنزیمهای مختلف مثل: پروتئاز ، لیپاز ، کتیناز و آلژینات از استرپتومایسس دریایی گزارششده است همچنین استرپتومایسس منبع خوبی از ال-آسپاراژیناز است که ال-آسپاراژین را به ال-آسپارتیک اسید و آمونیاک تبدیل میکند که بهعنوان عاملی برای شیمیدرمانی استفاده میشود. ال-آسپاراژیناز یک عامل ضد نئوپلاستیک است که در شیمیدرمانی لوسمی لنفوبلاستی حاد استفاده میشود. چندین استرپتومایسس زمینی شامل : استرپتومایسس ونزوئلا[۱]،استرپتومایسس کارناتاکنسیس[۲]،استرپتومایسس آلبیدوفلاووس[۳]، استرپتومایسس لانگ اسپروس فلاووس[۴]( سینگ و اسریواستاوا ،۲۰۱۲)
وجود ال-آسپاراژیناز خارج سلولی در قارچ منجر به تحقیقات عمیق در توزیع این آنزیم در میان جنسهای مختلف قارچی شده است. ال-آسپاراژیناز خارج سلولی قارچها به دلیل اینکه خیلی راحتتر از آنزیمهای داخل سلولی خالص میشوند , سودمند هستند . ( سینگ و اسریواستاوا ،۲۰۱۲)گزینههای ایده آل باید میل ترکیبی بالا ، سطح پایین ک(k)، نیمهعمر کافی ،ایمنیزایی کمتر و پایداری بالا داشته باشند. ( سینگ و اسریواستاوا ،۲۰۱۲)چندین مخمر شامل: کاندیدا ،[۵]کریپتوکوکوس،[۶]ساکرومیسس، [۷]پیچیا،[۸] رودوترولا، [۹]هانسنولا[۱۰]، اسپوروبلومیسس[۱۱] T بهعنوان تولیدکننده ال-آسپاراژیناز خارج سلولی شناخته شدهاند. آسپاراژیناز از چندین کپک شامل: فوزاریوم[۱۲]،پنیسلیوم[۱۳] وآسپرژیلوس[۱۴] گزارششده است( سینگ و اسریواستاوا ،۲۰۱۲)تولید آنزیم را میتوان بهوسیله تخمیر مایع(SMF) و تخمیر حالتجامد(SSF) انجام داد. ال-آسپاراژیناز در پردازش مواد غذایی نیز مورداستفاده قرار میگیرد( سینگ و اسریواستاوا ،۲۰۱۲)
تصور بر این است که کنترل میزان تولید آنزیم آسپاراژیناز بر مبنای مدل مورفین[۱۵] که یک روش تنظیمی آلوستریک[۱۶] است انجام میگیرد (سلوود[۱۷]و جف[۱۸]، ۲۰۱۱ ).مورفین، پروتئینی است که میتواند دو و یا تعداد بیشتری هومو-اولیگومر[۱۹] (فرمهای مورفینی) ایجاد کند، اما برای تبدیلشدن به این فرمها، لازم است که اجزایش از هم جداشده و تغییر شکل دهد (شکل ۱-۳) (جف، ۲۰۰۵).
[۱] S. venezualae
[۲] S. karnatakensis
[۳] S. albidoflavus
[۴] S. longsporusflavus
[۵] Candida
[۶] Cryptococcus
[۷] Saccharomyces
[۸] Pichia
[۹] Rhodotorula
[۱۰] , Hansenula
[۱۱] Sporobolomyces
[۱۲] Fusarium
[۱۳] Penicillium
[۱۴] Aspergillus
[۱۵] Morpheein
[۱۶] Allosteric regulation
[۱۷] Selwood
[۱۸] Jaffe
[۱۹] Homo-oligomers
[۱] Lang
[۲] Furth & Friedman
[۳] Clement
[۴] Kidd
[۵] Neuman
[۶] Mccoy
[۷] Walker carcinosarcoma
[۸] . Haley et al
[۹] Broome
[۱۰] , Wriston
[۱۱] Mashburn
[۱۲] E.coli
[۱۳] Yellin
[۱۴] Oettgen
[۱۵] Old
[۱۶] lymphosarcoma
[۱۷] Erwinia caratovora
[۱۸] poly(ethylene glycol)
[۱۹] antineoplastic
[۲۰] Lymphoproliferative disorders
[۲۱] FAD
[۲۲] Rossi
[۲۳] biodegradable
[۲۴] K D Kamble
[۲۵]L-asparaginase (L-asparagine aminohydrolase, EC 3.5.1.1)
[۲۶] Posttranslational modification (PTM)
[۲۷] Pisarewicz
[۲۸] Ashraf A.
[۱] Rao
[۲] Aspartic acid
[۳] Ammonia
تمامی فایل های پیشینه تحقیق و پرسشنامه و مقالات مربوطه به صورت فایل دنلودی می باشند و شما به محض پرداخت آنلاین مبلغ همان لحظه قادر به دریافت فایل خواهید بود. این عملیات کاملاً خودکار بوده و توسط سیستم انجام می پذیرد. جهت پرداخت مبلغ شما به درگاه پرداخت یکی از بانک ها منتقل خواهید شد، برای پرداخت آنلاین از درگاه بانک این بانک ها، حتماً نیاز نیست که شما شماره کارت همان بانک را داشته باشید و بلکه شما میتوانید از طریق همه کارت های عضو شبکه بانکی، مبلغ را پرداخت نمایید.
ارسال نظر